野生金基德 下载 pdf 电子版 epub 免费 txt 2025

金基德，这位韩国电影界的传奇人物，如何从“草根一族”一步步成为韩国媒体眼中的“21世纪最具领导潜力的导演”？如何“高效率”地制作“低成本”且获国际大奖的影片？成功的诀窍是什么？……金基德导演和多位韩国著名影评人、明星将在书中为读者一一解惑，展现一个立体的、真实的金基德 。

本书由四个部分构成，内容丰富翔实：第一部分“金基德如是说”，金基德动情自述他从韩国社会最底层到“当今韩国电影的国际代言人”的艰难历程；第二部分 “阅读金基德 ”，韩国资深影评人对金基德作品的深刻解读，以此透视金基德的内心世界；第三部分“众说纷纭金基德”，曹在显等著名韩国影星及金基德剧组成员披露拍摄细节，从中得以窥探金基德在片场的独特处理手法；第四部分“附录”中包括金基德的研究资料，以及金基德第一部获奖剧本《擅自穿越》——金基德作品的本源。

序一 “晤会”金基德 范小青

序二 为何选择金基德？ 郑圣一

【金基德如是说】

访谈：金基德的自我告白——孱弱男子的骇人之力 金　敬 / 金基德

随笔：金基德笔下的金基德 ——于我，电影即斗争 金基德

作家论：透视金基德——尽享你的“罪”意识 郑圣一

对话：当张正日遇到金基德——张正日的13问，金基德的11答 张正日 / 金基德

【阅读金基德】

金基德作品论之《鳄鱼》——《鳄鱼》——失败之歌，或曰反语？ 许文永

金基德作品论之《野生动物保护区域》——金基德原型，其散落的意象和独白 金奉锡

金基德作品论之 《蓝色大门》——再看《蓝色大门》 康汉燮

金基德作品论之 《蓝色大门》——底层女性失败的连锁日记，抑或超前抵达的最后关口 金志勋

金基德作品论之 《漂流欲室》——“垂钓”教育，以伤痛缔结关系 白文临

金基德作品论之 《漂流欲室》——凡常感、犹豫和沉默 刘运胜

金基德作品论之 《实际状况》——鳄鱼的白日梦 文一平

金基德作品论之 《收件人不详》——杂种、残疾和被迫害者的书信 金永镇

金基德作品论之 《收件人不详》——钉钉子的人，最终被钉 黄真美

金基德作品论之 《坏小子》——请让我回去，肉身和灵魂的性错位 金敬旭

金基德作品论之 《坏小子》——皮开肉绽，却了无痛感：以金基德的《坏小子》为中心 曹河亨

访谈：郑圣一问，金基德答——郑圣一遇见金基德 郑圣一 / 金基德

金基德作品论之 《海岸线》——从一而终的海兵，永劫不复的幽灵 郑圣一

金基德作品论之 《春夏秋冬又一春》 ——《春夏秋冬又一春》和电影的自然主义 朴成树

【众说纷纭金基德】

“突破极限”的金式风格 南东哲 / 曹在显

看似粗暴，其实却暗含一种感化 南东哲 / 方恩珍

金基德电影还在不断发展中 南东哲 / 李承载

没有修饰和技巧，但给人印象至深 郑基英 / 黄喆炫

一贯的风格，从痛苦中走来 郑基英 / 庆敏浩

他融会了艺术家和科学家等诸多最富经验性的想像力 郑基英 / 朴浩俊

一股牛劲造就了他 郑基英 / 徐延珉

情结，了不起的个人情结造就了今天的金基德导演 郑基英 / 徐　情

【附录：金基德研究资料】

电影剧本：《擅自穿越》

金基德电影资料

参考资料

论文、单行本、季刊、期刊资料

作者简介

金基德，韩国著名电影导演，被韩国媒体誉为“21世纪最具领导潜力的导演”，他善于“高效率”地制作“低成本”且荣获国际大奖的影片。他没有受过正规的影视教育，曾被拒于韩国电影“制度圈”之外，但他凭着不懈地努力与执着的信念，成为当今韩国电影的国际代言人。他的作品在全球各大电影节 上大放光彩：《撒玛利亚女孩》获柏林电影节最佳导演奖，《空房间》获威尼斯电影节最佳导演奖……

郑圣一，韩国著名电影评论家，本书主编。曾经是月刊《电影》的主编（1995—2000），并任首尔短片电影节常任主席（1994—1997），和全州国际电影节选片人（2000）。在一直在月刊杂志《话》开设有电影专栏，曾推出过上下册的访谈专刊《林权泽说林权泽》。

范小青，国内知名韩国电影研究专家。中国传媒大学影视艺术学院教师，电影评论人、专栏作家。毕业于北京广播学院、韩国中央大学。合著有《中韩电视剧比较研究》、《电影+2005》、《电影+2006》等。

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我认为比起“有知识”和“没知识“的区别，人与人之间的精神差异似乎更大。很多人为了撤除或重建世上的某种秩序而”呕心费神“，但也有一部分人对世界风云如何变化毫不关心，只是尽享其中的一切。

大部分“指南”都会教人一些智慧度世的秘方，例如怎样才能贤明地、纯粹地、不为俗世所欺地、智慧地走过一生。反过来想，这何尝不是一种将白与黑，善与恶明确、简单、分割化了的态度。这能说是一种“大善”吗？我不以为然。我们不是都相信心中有着从未谋面的 、善良的神的存在吗；不是每个人都在争辩：恶的本源不是我，而是世界将我变成了这样的吗？越是给真正的人生作指导的“指南”越会告诉你：恶存于世，你应该如何避其而行。这，难道不都是助长“恶”的错误意识的原因吗？

记得在工厂上班时，我曾见有人在看《安妮日记》之类的名著。那个人总是在工厂后面的墓园里阅读，还常常将背倚靠着某个墓碑……就那个姿势本身，我是不那么喜欢的。不知为何，背靠墓碑悠然读书，这种看似高雅清闲的风景总难入我眼。

一个人的诞生即一个宇宙的开始。因此在他的年代里，无论肉体还是精神，都应该是一种全新的生成。当然，即使他遵从先祖们遗留下的“圣书”也可以开始新的生活。不过我对这种“新生活”稍有异议。我怀念那没有教化年代的纯粹也许那是一种根本无法恢复的野生般的纯粹。虽然我们不能重新找回原始时代的那种不掺有丝毫杂质与经验的纯粹，但我依然反对那些和我一起走过人生的人们，崇奉先辈们整理出的人生指南为信条，以模仿某一个人的人生态度。

在拍摄过程中，曾有三个人就在我们的摄影机前让我们眼睁睁地看着他们跳下了江、其中一名我们记录了他寻死的全过程，另两名则被人救出。于是《鳄鱼》有机会原封不动地将紧急出动的助队、警车以及打尸体的蛙人们的真实生态拍摄下来。当时，我真想就此中断拍摄。因为我的影片让我感受到真真切切的现实，那也是我从“难道电影不是幻象”的疑问中被叫的瞬间。

难道真的没有天天都可以东西南北相互变换转化的空间吗？没理由的，我打心里想念那个一觉之后便可以将东边景致变到西边的空间，水面上漂浮着的家一一岛。

韩国大部分观众似乎不是在看电影，而是在观赏自己的劣等感。俊男美女，雄壮的大场面…难道不令人寒心吗？电影散场，就在电影院洗手间的镜子前，望着对比后托得更加简陋的自己，不是更加寒酸？全无对象地模仿电影里的大人物那样，对着空气指手画脚““他们就这样被支配着、生活着……

她并不是为“卖身”而卖身，她只是利用自己的身体来生活。我们不都是依靠自己的某个身体构造来生活的人吗？问题只是你动用了自己身体的哪一部分构造而已。我们没有将这种种差异理解成“生命形态”的不同，而是将之分解成了社会的一个个阶级

人们总是愿意在有道德约束的、最安全而基本的体系内，选择最普通的体位。一旦难易度稍加变化，便会产生所谓残害，自虐和受虐的说辞，而且这些行为本身就是含混难辨的。结果，自虐和受虐搅在一起便生出了爱情。爱，这种不可思议的情感，就是不时地用自虐骚扰你，直至死亡。于我而言，爱情或许是动物本能的一种回归，它应该是在消灭类似理性、道德性、社会地位和阶级之后，才开始的一种纯粹的感情。

——金基德

我倒是觉得，当今世界最了不起的人，要么去修道，要么是超市老板。

书籍介绍

金基德，这位韩国电影界的传奇人物，如何从“草根一族”一步步成为韩国媒体眼中的“21世纪最具领导潜力的导演”？如何“高效率”地制作“低成本”且获国际大奖的影片？成功的诀窍是什么？……金基德导演和多位韩国著名影评人、明星将在书中为读者一一解惑，展现一个立体的、真实的金基德 。

本书由四个部分构成，内容丰富翔实：第一部分“金基德如是说”，金基德动情自述他从韩国社会最底层到“当今韩国电影的国际代言人”的艰难历程；第二部分 “阅读金基德 ”，韩国资深影评人对金基德作品的深刻解读，以此透视金基德的内心世界；第三部分“众说纷纭金基德”，曹在显等著名韩国影星及金基德剧组成员披露拍摄细节，从中得以窥探金基德在片场的独特处理手法；第四部分“附录”中包括金基德的研究资料，以及金基德第一部获奖剧本《擅自穿越》——金基德作品的本源。

• 作者：白 发布时间：2013-03-12 15:58:36

  并不觉得金的电影有多精湛，或者说技艺上的＂好＂，甚至在常人的观念下显得还有些＂变态＂，但他毫无疑问地令我感到熟悉，小城，少年，闲逛和争吵，性的困惑，对美好质疑...从不遮掩，让人喘不过气来又满心喜欢，那个时候甚至矫情的觉得：他就是为我们生活在最底下这类人拍电影的人

• 作者：林||我们谈什么都像谈死！ 发布时间：2013-08-03 19:18:12

  目前国内唯一一本研究金基德的书，内容很全面，金基德生平，答记者问，作品影评，和作者说金基德，被采访者说道他，用得最多的词是纯真，我也相信在这些让人乍舌的故事下，隐藏的是导演的赤子之心。本书只说到《春夏秋冬又一春》，所以大部分还停留在早期猎奇的故事上，让他名扬海外的作品几乎没说（《坏男人》除外）。书的最后附上了他得到编剧奖的剧本，非常棒，拍出来应该是典型的有着丰富而又奇特故事的金基德作品。希望能有近期的研究金基德的著作出现。

• 作者：丁小云 发布时间：2013-04-05 12:04:03

  这几天在读这本买了很久的《野生金基德》，它给了我一些启发，当头棒喝式的启发，醍醐灌顶式的启发。因为这本书，对于一些思考很久的问题都有了全新的认识。美中不足是这本书还收入了很多影评文章，还好影评中依旧有一些挺有价值的金基德思想碎片……

• 作者：法 发布时间：2012-04-03 12:42:40

  大连，奥体中心买的，第一本大部头，宿舍离公司很近，靠海，下班了看一点，生活很平静

• 作者：临素光 发布时间：2017-04-13 10:21:47

  金基德的访谈很有参考价值，对普遍误解的部分给出了解答，例如《坏小子》里亨吉和森华被大家理解为柏拉图式的非肉体关系，金基德给予了否定。关于童年以及青少年时代的黑暗面，他都做了详细的描述，这对于理解他的电影，可谓一条捷径。影评部分非常专业，兼具思想性和可读性，很喜欢。演员的访谈可略略翻过。

• 作者：tvpeople 发布时间：2012-01-04 09:57:48

  密密麻麻，文字密度太大，我看不懂。06、07年看撒玛利亚少女和弓的日子，倒仿佛还在昨天。金基德的残酷，苍凉，像熨斗一样在熨人的灵魂，现在老了根本不敢看啊。

• 《都柏林人》读后感

  作者：自由之地 发布时间：2010-12-24 17:25:54

         乔伊斯曾经说《都柏林人》的创作宗旨：“是要为我国的道德和精神史写下自己的一章”。但我以为，通过乔伊斯那敏锐的观察力揭示出来的有关都柏林人的精神状况，也可以说是全人类，尤其是现代社会人的精神状况。比如，《姐妹们》和《圣恩》所暗示的天主教信仰衰落的事实既是都柏林存在的现象，也是整个世界现代化过程中，人类思想世俗化过程中相伴随的现象。而《一小片阴云》里那个被上司侮辱的小职员不正是现代资本主义社会中被资本所压迫的人的一个缩影吗？还有《痛苦事件》，那个保持自身独立的知识分子的思想，大概在所有自有知识分子的脑海中都能窥见相似的痕迹。总之，生长于都柏林的乔伊斯，在其作品中无疑会带有周围环境影响的痕迹，但是我们决不能将《都柏林人》仅仅担当做一部地域性的小说。从一种以人为出发点的视角去阅读，无疑将给我们带来更大的启示。

                            《姐妹们》

      以一个现代主义风格浓厚的段落开头。直接切入叙事者的意识流。向读者有限地透露出佛林神父的信息。接着便是叙事者从其姑父、姑母和老柯特那里听来的对话。从众筛选出一条小而重要的信息：佛林神父死了。然后，叙事者自己夹叙夹忆起自己跟佛林神父的交情。但叙事者同他的姑母拜访居丧之家时，佛林神父的形象由他的亲人描述。从中，我们了解到了佛林神父的死因：因为打碎圣杯而积郁而死。结尾处提到众人看见佛林神父独自忏悔都认为他有毛病。这一细节似乎暗示着作者对都柏林人天主教信仰沦丧的忧虑。

  死人是不会说话和行动的。只有透过他人的嘴，我们才能了解都一个逝去的人的形象。因而，整篇小说就像是一个关于佛林神父的间接描写，通过众人的回忆，一个虔诚的天主教徒的形象油然而生！

                             《一次遭遇》

      乔伊斯对人类内心的观察是极其敏锐的。这种敏锐表现在小说的最后一句话中：“他跑过来像是救我似的。而我却觉得懊悔；因为我内心总有些瞧不起他。”当小说中的叙事者“我”不愿意同一位老者继续交谈却无计逃脱时，拯救者出现了，可这个帮了“我”大忙的人却曾被“我”瞧不起，“我”的愧疚油然而生。

                             《阿拉比》

      一个关于男孩暗恋的故事。小说起先着力刻画男孩心中无法遏制的爱火。接着着力渲染男孩焦急的心情：因为男孩为了赢得女孩的关注，希望到女孩向往的大市场“阿拉比”走一趟，可是原本答应给男孩路费的姑父确迟迟没有回家。最后，男孩拿着姑父的钱，赶在“阿拉比”关门前游览了市场。可是，当大厅灭灯之后，男孩对自己的幼稚和虚荣感到深深的悔恨。小说的结尾是个不小的转折，许多读者在阅读小数的前两部分时可能会猜测结尾是女孩正是接受男孩的结局。他们可能觉得，小说对男孩爱火以及他在等待姑父时焦急心情的渲染是为了突出结局的幸福感。可是，乔伊斯给他们一个意想不到的峰回路转。从而，小说有惊无险地脱离了浪漫爱情故事的俗套。这也意味这小说向现实更靠近了一步。毕竟，现实很少如人们的想象那样完美浪漫。人们往往收获的不是预料中的，而是意想不到的，也就在这些意想不到中，人们成长。

                                《伊芙琳》

      一个女孩的私奔故事。伊芙琳，一个辛苦工作以维持家庭生计的女孩。在沉重的家庭责任和男友幸福的许诺之间，刚开始，她选择了后者。当她与男友私奔到码头时，挣扎之间，她又选择了后者。这个故事的亮点在于，乔伊斯营造了一个巨大的转折：当读者以为女孩的心中的矛盾即将朝向一个方向时，它又决绝地转到另一个方向。从而，我们被引向有关个人自由的思考：人能够完全脱离他所身处的关系而进行自由选择吗？伊芙琳的答案是否定的。也许因为她放不下她的家人，也许因为她害怕脱离家人会受到更大的伤害。

                          《赛车以后》

      青年人花天酒地的生活是有害的。这个道理是小说通过对比暗示给读者的。小说结尾对青年人的赌博的描写暗示了赌徒们的虚荣——反面教材；正面教材则是那个没有参加赌博但告诉赌徒们天亮了的匈牙利人。

                          《两个浪汉》

      在小说中，乔伊斯展示了他暗示和“卖关子”的能力。当科尔利告诉莱尼汉，自己将要去与一位年轻女子约会时，也勾起了读者对于男女关系进展的好奇。可是，接下来一大段故事叙述的全是莱尼汉独自活动的所见所闻——作者故意不去提及科尔利与年轻女子的发展——他吊足了读者的胃口。到了的最后，小说也没有明说科尔利是否成功，而是通过展示科尔利手中的一枚小金币做出暗示。

                            《公寓》

      一个单身汉沦陷的故事。小说从一个不同寻常的视角审视了婚姻的形成：即有些婚姻并非是基于纯洁的自愿，而是算计和伪装协作的结果。小说通过分别描述穆尼太太和女儿帕丽揭示出了女人狡猾的内心。其中，对帕丽的描写最为精彩，小说结尾处，“她耐心等待着，几乎是欢欢喜喜，毫无惊恐之状，他的回忆渐渐变成了对未来的希望和憧憬。……也忘记了她等待着什么。”“‘下来，亲爱的。多伦先生想跟你谈谈。’这时候，她记起了一直在等待着什么。”——乔伊斯细腻地把握了女性心理的微妙变化。

                           《一小片阴云》

      《一小片阴云》像是《公寓》的发展，后者揭示出了即将结婚男人的不幸，而前者则揭示出了已婚男人的悔恨。为了充分表现这个不幸。乔伊斯像是为已婚男人小钱德勒设置了一个生意成功而且生活自由的朋友加拉赫。因为两人在生活上的巨大差异，小钱德勒感到相形见绌。自己的劣势的原因被归结为婚姻的束缚。劣势很快转变为沮丧。通过小钱德勒回家后的举动变现出来：他希望诗歌释怀他的苦闷。可是，也就是哪怕这么一点小小的向往自由的举动，也引来了儿子的哭泣和老婆的责骂。已婚男人无可奈何了，只能流下悔恨的泪水。

                          《何其相似》

      在《何其相似》中，乔伊斯将关注视角转移到小人物的身上。小人物多收经济窘迫的困扰，也因为这个困扰，他们在工作中不得不忍受上司的压迫。当他们试图直白地表达自己的感受时，又因为对被辞退的顾虑而备受煎熬。这些问题已经足以使人喘不过气来了，无奈又因为一些类似输掉掰手腕比赛这样偶然的事件而是自身尊严进一步受损。到头来，所有的不满只能发泄到无辜的孩子身上。这是一件世界通用的法则。

                              《泥土》

      有关大龄未婚女人的故事，因为苦于没有伴侣，只能将关怀施与朋友和朋友的孩子。表面上维持着平静，内心却蒸腾着对爱的渴求。一言一行中总难免会泄露出心里真实的轨迹，比如眼泪和苦涩的笑。

  不得不提及小说一个出彩的地方：当玛利亚被蒙住眼睛，孩子们给了她摸一堆又软又湿的东西——让她猜猜为何物——读者自然也希望知道，可是故事通篇都没有说明，只有题目给出了答案——“泥土”。为什么使用泥土呢？也许泥土在爱尔兰具有特殊的文化意义吧？或者对玛利亚具有特别的意义。虽然我不明原因，但是，借用小说题目解答故事中疑问的做法无疑是独到的。

                           《痛苦的事件》

      在这篇小说里，乔伊斯揭示出的也许是自由知识分子身上的共性：他们竭力维持自己在思想上独立性，也就是因为这一目的，他们通常避免自己的日常生活陷于某种固定的关系。他们对社会和他人具有一定的关怀，也渴望获得精神上的交流者，但是警惕地与他人保持距离，最终只能自觉或不自觉地接受孤独的命运。一个人的可喜之处通常也是他的可悲之处。

                    《委员会办公室里的常青节》

      通过人物的对话，揭示出爱尔兰政治环境的恶劣。小说最具有讽刺意味的地方在于，所有丑恶的揭示，恰恰在爱尔兰最具有意义的常青节那天。

                              《母亲》

      一个说话犀利、令人难堪的母亲恰恰是一位竭力维护女儿权利的母亲。她的坚持，甚至能够赢得对手私下的赞许。从这一点出发，能否联想，一个竭力维护权利的人必定能够赢得甚至是对手的赞许呢？不知道乔伊斯是否在小说中埋伏此意义。

                                《圣恩》

      我想《圣恩》最让人着迷的地方在于其隐晦的主旨：小说究竟是强调天主教适应了现代社会的变革还是敲掉天主教为了迎合现代社会而发生了退化？我之所以产生这样的疑问，也许跟我没有天主教信仰有关：我不了解天主教的教义以及一个信徒应有的精神状态。可如果非要我表明态度的话，我更倾向于认为小说是在嘲讽天主教因迎合现代社会而发生了退化。原因有四：1.当朋友们劝柯南先生信仰天主教时，柯南先生虽然答应参加绝大多数的宗教活动，但却坚决不拿蜡烛。这无疑表明柯南先生并没有完全接受天主教——似乎还暗示着柯南先生之所以表示愿意参加宗教活动实际上是受到朋友们的压力——友情的压力；2.小说在描写教堂里的人时，特别介绍了教徒里有放债者、选取新选议员、选举注册代理、当铺老板、谋求市长秘书处位子的人等。同时，小说还特别提到“由于柯南先生认出了一些熟悉的面孔，他渐渐觉得自在多了。”我对此的理解是，作者暗示那些人是为结交有钱或有势的人才来到教堂的，教堂成为他们广交“朋友”的好地方。柯南先生“渐渐觉得自在”，表明他领悟到了天主教信仰和教堂的“真正用途”；3.神父在讲道时，将《圣经》某一段落做了取悦商人的解释：“耶稣基督用这句话旨在给他们一个忠告，他把那些无限崇拜财神而实是人间最不关心宗教事务的人，作为宗教生活中的典范放到了他们面前”；4.小说最后一段：“我已经能够核对过我的账目。我发现这项错了，这项也错了。但是，仰赖天主的圣恩，我决心改过所有的错误。我会把我的账目纠正过来。”这一段在表面上是神父讲道的内容之一。但是，我却猜测这一段也可以理解为柯南先生内心独白：作为推销员的他领悟到确实应该纠正自己的“账目”了。

                           《死者》

      《死者》在《都柏林人》包含的所有小说中是篇幅最长、涉及人物最多的。我对它的猜测是：这篇小说也许是乔伊斯为了开始长篇小说写作而作的练笔。他要开始尝试处理更多的人物——他们外貌、特征、对话以及人物之间的关系。因而，《死者》的主要场景设置在一间大屋子里，而屋子正开着舞会，众人来到那里狂欢，从而发生了彼此的多种交流。而在小说的最后部分，但众人离去，加布里埃尔同妻子在旅店房间独处时，作者则集中精力描述加布里埃尔的“意识流”。而正如我们知道，乔伊斯是小说意识流写作大师级人物，他在他其后发表的小说中都延续使用了这一风格。

      最后的话

      或者，我们可以说，整部《都柏林人》都是乔伊斯为写作长篇小说所做的联系。而当我们从这个角度去阅读《都柏林人》时，也就是当我们从一个小说写作技巧的角度去阅读它时，我们简洁地获得了理解乔伊斯其它长篇小说的钥匙。这是我从《都柏林人》中获得的最大收获。

• 《CRISPR基因编辑技术》书钞之一

  作者：Cheshire cat 发布时间：2022-10-24 17:25:04

  CRISPR-Cas

  基因座由一系列编码

  Cas

  蛋白的基因和一个

  CRISPR

  重复间隔序列组成[

  9

  ]。典型的

  CRISPR

  重复间隔序列由一段前导序列、一系列短的高度保守的正向重复序列和间隔序列依序排列组成[

  10

  ]

  。

  与传统的核酸酶介导的

  DNA

  编辑技术锌指核酸酶（

  ZFN

  ）和类转录激活因子效应物核酸酶（

  TALEN

  ）不同，

  CRISPR-Cas9

  系统对

  DNA

  识别的特异性不是由蛋白质决定[

  24

  ]，而是由

  20nt

  向导

  RNA

  决定[

  25

  ]。因此无需对核酸酶上的

  DNA

  识别结构域进行繁琐的蛋白质工程改造[

  26

  ]，从而极大地扩展了

  CRISPR-Cas9

  在大规模基因组操作或筛选中的应用以及在科学界的适用性。

  ATP

  依赖的解旋酶活性存在的情况下，

  PAM

  识别如何触发诱导

  R

  环形成。

  在

  PAM

  识别并随后形成

  RNA-DNA

  异源双链体后，

  Cas9

  酶被激活以进行

  DNA

  切割[

  30

  ]。

  Cas9

  使用两个核酸酶结构域行使功能，一个是三段分开的

  RuvC

  基序组成的保守

  RuvC

  结构域，另一个是位于蛋白质中间的

  HNH

  结构域。每个结构域都在距

  NGG PAM

  序列

  3bp

  的特定位点切割靶

  dsDNA

  的一条链，以产生末端为平末端的

  DSB

  [

  18,20

  ]。但是，

  Cas9

  切口酶（对于

  SpCas9

  为

  D10A

  或

  H840A

  ）只能切割

  DNA

  双链体的一条链，从而导致单链断裂[

  20

  ]。

  Cas9

  切割包含

  PAM

  片段和

  20nt

  靶链，但不包含非靶链的部分双链体时，其速率与切割完全配对的靶

  dsDNA

  几乎没有区别[

  30

  ]。

  在这种模型中，向导

  RNA

  的结合触发了

  Cas9

  的构象重排[

  29,36

  ]，这将

  Cas9

  酶从非活性状态转变为具有

  DNA

  识别能力的构象[

  36

  ]。

  RNA

  种子序列以

  A

  型构象进行预排序以结合靶标链，并预定位了

  PAM

  识别位点以进行

  PAM

  检测[

  36

  ]。

  Cas9

  与

  PAM

  序列的初始结合使酶可以快速“询问”邻近的

  DNA

  ，用于识别潜在的靶序列[

  30

  ]。一旦

  Cas9

  找到含有适当

  PAM

  的潜在靶标，它将启动双链解链并继续对靶序列进行检测[

  30,44,59

  ]。磷酸酯锁环可稳定解链后的靶

  DNA

  链，使靶

  DNA

  序列的第一个碱基朝向导

  RNA

  翻转并向上旋转以进行碱基配对[

  37,46

  ]，而

  Cas9

  与非靶链上的翻转碱基相互作用则有助于双链解旋[

  37,58

  ]。

  Cas9

  的向导

  RNA-

  靶碱基配对和相应的构象变化有助于引导

  RNA

  链侵入种子区域之外[

  31

  ]。非种子区域依次从约束中释放[

  37

  ]，碱基配对传播到引导序列的

  5′

  末端[

  30,44

  ]。这种渐进式碱基配对在

  Cas9

  内诱导进一步协调一致的构象变化，直到达到有活性状态[

  54,57

  ]。最终，向导

  RNA

  和靶

  DNA

  的完全退火可使

  HNH

  达到稳定、有活性的构象，以切割靶链[

  37,58

  ]。

  HNH

  构象变化的同时，其两端的铰链区也发生构象变化，进而将非靶链引导至

  RuvC

  催化中心，以实现协同一致的切割[

  37,56

  ]。切割后，

  Cas9

  仍与切割的靶

  DNA

  紧密结合，直到其他细胞因子取代酶以进行重复使用[

  30

  ]。

  根据

  CRISPR-Cas

  基因位点结构和

  Cas9

  系统发育，

  Ⅱ

  型

  CRISPR

  系统进一步分为

  Ⅱ-A

  、

  Ⅱ-B

  和

  Ⅱ-C

  三种亚型[

  61

  ]。迄今为止，

  CRISPR-Cas9

  系统几个亚型的代表性成员已被成功用于真核生物中的基因组编辑。其中，化脓性链球菌的

  Ⅱ-A

  亚型

  Cas9

  （

  1368

  个氨基酸）是基因组工程研究最常用的

  Cas9

  版本，而金黄色葡萄球菌的

  Cas9

  直系同源物（

  SaCas9

  ，

  Ⅱ-A

  亚型）[

  62

  ]和脑膜炎奈瑟氏球菌

  Cas9

  （

  NmeCas9

  ，

  Ⅱ-C

  亚型）[

  63

  ]，由于其较小的长度（

  <1100

  个氨基酸），具有容易被

  AAV

  病毒包装后向体细胞组织进行基因递送的潜在优势。相反，来自新凶手弗朗西斯菌的

  Ⅱ-B Cas9

  亚型（

  FnCas9

  ）由

  1629

  个氨基酸组成，明显大于来自

  Ⅱ-A

  和

  Ⅱ-C

  亚型的其他

  Cas9

  直系同源物[

  60

  ]。除了不同的长度和序列外，

  Cas9

  直系同源物能识别不同的

  tracrRNA

  ：

  crRNA

  双链体的

  PAM

  序列[

  60

  ]。例如，

  SpCas9

  识别紧邻靶

  DNA 3′

  末端的

  5′-NGG-3′PAM

  序列，具有特定的切割活性，而

  SaCas9

  识别

  5′-NNGRRT-3′PAM

  ［其中

  R

  代表一个嘌呤（即

  A

  或

  G

  ）］[

  62

  ]，

  FnCas9

  特异性检测靶

  DNA

  下游的

  5′-NGG-3′PAM

  基序[

  64

  ]

  在不直接改变

  DNA

  序列的情况下操纵转录和基因表达是染色质生物学领域长久以来的目标。

  与一般的基因组编辑不同，表观基因组编辑中脱靶效应的缓解不仅与

  dCas9

  在特定基因位点的

  DNA

  结合活性有关，而且与修饰标记在特定核小体上的时空精度相关。

  表观基因组编辑实验中抗体特异性不足的其他局限性可能会随着工业界和学术界之间越来越多的合作关系而变得不那么突出，这有助于激发大家对于开发高特异性抗体的共同兴趣。学术界应该团结一致地行使其商业权力，并要求工业界改进标准化的操作和提升内部质量控制，以最大限度地减少商业抗体供应（尤其是多克隆供应商）中常见的批次间差异。鉴于使用可靠和足够的抗体对于促进研究人员的研究结果可重复性具有重大意义，因此，科研群体必须利用资源开放的方式来展示和验证表观遗传实验中的抗体性能，例如开放抗体验证数据库和抗体特异性数据库[

  36,55

  ]。组蛋白乙酰基转移酶和其他表观遗传效应子有限的底物特异性对有效和可编程的

  CRISPR

  介导的表观基因组编辑的发展造成了巨大的障碍。为了降低某些表观遗传效应子之间底物混乱性和提高同源靶标蛋白的选择性，可能需要详细的结构信息和繁琐的蛋白质工程改造。表观基因组的读码因子、编码因子和擦除因子的结构特征（包括单个蛋白以及它们形成的复合物）对于指导旨在开发化学探针以调节表观遗传调控子的工作也至关重要。

  锌指核酸酶和

  TALEN

  等较旧的技术已被证明仍然是具有价值的，并且可以继续用作表观基因组编辑工具[

  24,137

  ]